Ágar Batata- Introdução, princípios, preparo.

Você sabe o que é um Ágar Batata ou Potato dextrose ágar?

O Ágar batata  é muitas vezes abreviado como Ágar PDA. A maioria dos micologistas o usa amplamente como um meio  de cultura de uso geral para leveduras e fungos que podem ser identificados até certo ponto com base em suas características morfológicas e sua pigmentação em cultura, muitas vezes sendo importante para a identificação de culturas.

O Potato dextrose ágar, portanto, auxilia no cultivo e diferenciação de fungos patogênicos e não patogênicos.

Princípio do meio de cultura

O  Ágar Batata é um meio de cultura  crescimento microbiano frequentemente utilizado para o cultivo de bolores, leveduras e outros fungos. É composto de infusão de batata e dextrose (também conhecida como glicose).

A infusão de batata e dextrose como fonte de carboidratos suportam o crescimento exuberante de fungos e bactérias e observa-se que estimulam a esporulação de fungos e a produção de pigmentos em certos dermatófitos.

Composição do Ágar Batata

Ingredientes Gms / Litro:

• Infusão de batatas 200.000.
• Dextrose (glicose) 20.000.
• Ágar 15.000.
• pH após esterilização (a 25°C) 5,6 ± 0,2.

Preparação do Ágar batata

Etapas envolvidas na preparação da infusão de batata:

1. Tome 200 g de batata para 1L de preparação de meio Ágar Batata
2. Lave a batata para remover a sujeira.
3. Retire a pele e pique-as
4. Adicione os pedaços a 1L de água destilada.
5. Ferva por 20-25 min em uma chapa quente.
6. Colete o extrato através do pano de musselina.

A preparação da meio usando as matérias-primas acima é bastante tediosa. Assim, nos últimos tempos, a forma infundida de batata está sendo substituída por amido de batata/extrato em pó comercialmente disponível.

4 g de extrato de batata em pó equivalem a 200 g de infusão de batata.

Reagentes

Junto com os reagentes mencionados na tabela

• 1N KOH
• HCl 1N

Instrumentos e outros requisitos

• Copo de vidro
• Frasco Cônico / Frasco Erlenmeyer
• Espátula
• Cilindro de medição
• medidor de pH
• Balança de pesagem
• Água destilada
• Papel manteiga
• Agitador magnético e pellet
• Pipetas e ponteiras
• Placas de Petri e/ou tubos de ensaio
• Prato quente

Procedimento para preparo do Ágar Batata

1. Pese os ingredientes separadamente em relação ao volume da meio. (Aqui, estamos considerando 1L da meio).
2. Suspenda os ingredientes como infusão de batata (200 g) ou extrato de batata (4 g) e glicose (também conhecida como dextrose) 20 g em um béquer de vidro contendo cerca de 900mL de ddH ₂ O.
3. Dissolva os componentes no béquer usando um agitador magnético. (O calor pode ser aplicado para dissolver completamente o meio).
4. Ajuste o pH do meio para 5,6 usando HCl 0,1 N e KOH 0,1 N.
5. Ajuste o caldo para um volume final de 1 L usando ddH ₂ O.
6. Transferir o caldo para frasco cônico ou alíquota em volumes menores.
7. Agora adicione ágar de acordo com o volume do meio (ou seja, 15 g de ágar para 1 litro do meio., 3,75 g para 250 ml).
8. Feche a boca do frasco com um tampão de algodão. Sele-o ainda mais com papel e elástico.
9. Autoclave por 20 min a 15 psi (1,05 kg/cm ² ) em ciclo líquido.
10. No entanto, se os antibióticos forem incluídos, suas soluções estoque devem ser esterilizadas por filtro antes de serem adicionadas ao meio. Esses antibióticos devem ser adicionados após o resfriamento do meio a cerca de 45-50ºC.
11. Algumas formulações preferem a adição de ácido tartárico estéril (10%) em vez (ou em combinação) de antibióticos. O ácido tartárico diminui o pH para cerca de 3,5. O pH reduzido inibe o crescimento de bactérias.
12. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis ou tubos inclinados.

Armazenamento do meio de cultura

Armazenar no escuro a 2-8ºC. As placas podem ser usadas por uma semana quando armazenadas em uma área estéril limpa.

Cuidado

O aquecimento do ágar batata dextrose após a acidificação deve ser evitado, pois pode hidrolisar o ágar e destruir as propriedades de solidificação.

Limitações

Como o Potato Dextrose Ágar é um meio de uso geral e não diferencial, apenas a identificação presuntiva é possível observando a morfologia da colônia. Exames microscópicos e testes bioquímicos devem ser seguidos para identificar isolados para gênero e espécie.

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