O que é PCR em Tempo Real? Quais são suas etapas? Vantagens e Materiais de laboratório utilizados.
Você já ouviu falar em PCR em tempo real? Essa técnica de diagnóstico é um dos métodos mais eficazes para identificar doenças virais e bacterianas. Com sua capacidade de detectar pequenas quantidades de material genético, o PCR em tempo real é crucial para diagnosticar infecções precocemente e prevenir a disseminação de doenças contagiosas. Neste artigo, vamos explicar tudo o que você precisa saber sobre essa técnica inovadora e como ela está revolucionando a medicina moderna.
PCR é uma abreviação para um simples procedimento mas muito úteis em biologia molecular chamado o polymerase cHain reaction . É uma técnica usada para amplificar um segmento de DNA de interesse ou produzir lotes e lotes de cópias.
Em outras palavras, o PCR permite que você produza milhões de cópias de uma sequência de DNA específica a partir de uma amostra inicialmente pequena – às vezes até mesmo uma única cópia. É um processo crucial para uma gama de tecnologias genéticas e, de fato, permitiu o desenvolvimento de um conjunto de novas tecnologias.
Como funciona o PCR?
O PCR imita o que acontece nas células quando o DNA é copiado (replicado) antes da divisão celular, mas é realizado em condições controladas em um laboratório. O equipamento de laboratório usado é simplesmente chamada de máquina de PCR ou termociclador. Tubos de ensaio contendo a mistura de DNA de interesse são colocados na máquina, e a máquina altera a temperatura de acordo com cada etapa do processo.
A tecnologia do PCR em tempo real é uma das mais importantes ferramentas para o diagnóstico de doenças. Ela permite a identificação e quantificação de pequenas quantidades de material genético, o que é essencial para o diagnóstico preciso de doenças. Além disso, a tecnologia do PCR em tempo real também pode ser usada para monitorar o progresso da doença e avaliar o efeito de tratamentos.
A tecnologia do PCR em tempo real é baseada no método de amplificação de ácidos nucleicos, conhecido como reação de polimerase em cadeia (PCR). A PCR é um método que usa enzimas para copiar seqüências específicas de ácidos nucleicos. O resultado da PCR é então visualizado usando fluorescência. Isso permite que os pesquisadores detectem e quantifiquem a presença de genes específicos no material genético analisado.
Por que o PCR é importante?
A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma ferramenta importante para muitas aplicações. Por exemplo, pode ser usado para amplificar uma amostra de DNA quando não há o suficiente para analisar (por exemplo, uma amostra de DNA de uma cena de crime, amostras arqueológicas), como um método de identificação de um gene de interesse, ou para testar doença.
A PCR tornou-se uma ferramenta importante para o diagnóstico médico. A PCR pode detectar e identificar bactérias e vírus que causam infecções como tuberculose, clamídia, meningite viral, hepatite viral, HIV, citomegalovírus e muitos outros. Uma vez que os primers são projetados para o DNA de um organismo específico, o uso de PCR para detectar a presença ou ausência de um patógeno no sangue ou tecidos de um paciente é um experimento simples.
O PCR também é usado em testes genéticos, para determinar se os pacientes carregam uma mutação genética que poderia ser passada para seus filhos (por exemplo, a mutação que causa a fibrose cística) ou para determinar o risco de doença nos próprios pacientes (por exemplo, uma mutação no gene BRCA1 predispõe uma mulher com câncer de mama ou de ovário). O PCR é usado para amplificar o gene, que é então sequenciado para procurar mutações.
Os ingredientes padrão da mistura são:
- o segmento de DNA de interesse
- primers específicos
- enzima polimerase de DNA resistente ao calor
- os quatro tipos diferentes de nucleotídeos de DNA
- os sais necessários para criar um ambiente adequado para a ação da enzima.
Qual é o processo de PCR?
Etapa 1: desnaturação
Como na replicação do DNA, as duas fitas na dupla hélice do DNA precisam ser separadas.
A separação acontece pelo aumento da temperatura da mistura, fazendo com que as ligações de hidrogênio entre as fitas complementares de DNA se rompam. Este processo é denominado desnaturação .
Etapa 2: recozimento
Os primers ligam-se às sequências de DNA alvo e iniciam a polimerização . Isso só pode ocorrer quando a temperatura da solução for reduzida. Um primer se liga a cada fita.
Etapa 3: extensão
Novas fitas de DNA são feitas usando as fitas originais como modelos. Uma enzima DNA polimerase une nucleotídeos de DNA livres . Essa enzima geralmente é a Taq polimerase, uma enzima originalmente isolada de uma bactéria termofílica chamada Thermus aquaticus. O ordemem que os nucleotídeos livres são adicionados é determinado pela sequência de nucleotídeos na fita de DNA original (molde).
O resultado de um ciclo de PCR são duas sequências de fita dupla de DNA alvo, cada uma contendo uma fita recém-feita e uma fita original.
O ciclo é repetido muitas vezes (geralmente 20-30), pois a maioria dos processos que usam PCR precisam de grandes quantidades de DNA. Leva apenas 2–3 horas para obter um bilhão ou mais de cópias.
Vantagens do PCR tradicional para o PCR tempo real.
As reações químicas em tempo real permitem a detecção de amplificação de PCR durante as primeiras fases da reação. Medindo a cinética da reação em as fases iniciais do PCR fornecem uma vantagem distinta sobre o tradicional Detecção de PCR. Os métodos tradicionais usam géis de agarose para a detecção de Amplificação por PCR na fase final ou ponto final da reação de PCR.
A técnica de PCR em tempo real é um método muito sensível para detectar material genético, o que pode ser útil para diagnosticar doenças. No entanto, esta técnica tem algumas desvantagens.
Vantagens:
• É um método altamente sensível que pode detectar até a presença de material genético em pequenas quantidades.
• Os resultados são obtidos rapidamente, pois ocorre durante o processo de amplificação.
• Pode-se monitorar vários alvos simultaneamente.
• É possível realizar uma quantificação exata dos produtos de amplificação.
Desvantagens:
• A reação é cara se comparada com outros métodos disponíveis.
• Exige equipamentos especializados para a execução da reação e análise dos resultados.
• Dependendo do alvo, a técnica pode ser complexa e ineficiente por causa das limitações da cadeia de PCR.
Os equipamentos e consumíveis para PCR em tempo real são os mesmos que para a PCR convencional, com a adição de um dispositivo de fluorescência que mede a quantidade de produto final a cada ciclo. Isso permite que os resultados sejam obtidos em tempo real, ou seja, durante o experimento.
A principal vantagem da PCR em tempo real é que ela permite um diagnóstico mais rápido e preciso de doenças infecciosas. Além disso, ela também pode ser usada para monitorar o progresso da doença e avaliar o efeito de tratamentos.
Plásticos para biologia molecular e termocicladores.
Ponteira para Micropipeta
Encaixe universal compatível com as principais marcas de micropipetas monocanal e multicanal
disponíveis no mercado;
• Graduação que proporciona segurança através da confirmação visual dos volumes dispensados;
• Produzidas em polipropileno virgem;
• Tecnologia de Baixa Retenção;
• Opções de embalagem: rack, pacote e sistema Reload;
• Autoclavável (121°C, 15psi, 15min.);
• Racks com número do lote, modelo e descrição da ponteira
impressos na tampa para melhor identificação e rastreabilidade
dos produtos;
• Livre de DNA, DNase, RNase e pirogênios.
Microtubo tipo Eppendorf
Volumes: 1,5mL e 2,0mL;
• Fundo autossustentável ou cônico;
• Velocidade máxima de centrifugação: 30.000 x g;
• Áreas de marcação nas laterais e tampas;
• Tampas com O-Ring de vedação em silicone,
à prova de vazamento;
Autoclavável (121°C, 15psi, 15min.);
• Livre de DNA, DNase, RNase e pirogênios;
• Microtubos e tampas vendidos separadamente.
Microplaca para PCR
• Formato padrão 96 poços;
• Identificação alfanumérica;
• Autoclavável (121°C, 15psi, 15min.);
• Livre de DNA, DNase, RNase e pirogênios.
Tubo Criogênico
- Fabricados em polipropileno (PP).
- Fundo auto-sustentável.
- Tampa com rosca externa e sem anel de vedação.
- Podem ser identificados por cores utilizando discos de inserção (Consulte discos).
- Graduado e com código de barra impresso em cada tubo e superfície para marcações de amostras.
- Suporta temperaturas na faixa de -196ºC (-321ºF) a +121ºC (+250ºF) para armazenamento em nitrogênio e ultrafreezer.
- Livres de DNAse, RNAse e metais pesados, não pirogênicos.
- Esterilizados por raios gama (não são embalados individualmente).
Resumindo
Ao longo dos anos a linha de produtos para PCR e consumíveis para laboratório em todo o mundo se tornou referência para análises de pcr e o aprimoramento desse tipo de material se tornou importante para a realização de pesquisas em pcr. Solicite seu orçamento.
Participe do nosso blog, envie seu comentário, dúvida ou sugestão.
AVISO DE DIREITOS AUTORAIS: Todo o material deste blog, sendo proibida toda e qualquer forma de plágio, cópia, reprodução ou qualquer outra forma de uso.
Qualquer dúvida técnica sobre os equipamentos contidos no portfólio SPLABOR, entre em contato com o Departamento de Vendas ([email protected])
