O que é Agarose? Trabalhando com Eletroforese

O que é Agarose? Qual a sua função? Onde é utilizada?

 

Se você é estudante ou profissional da área de biologia, certamente já ouviu falar em agarose eletroforese. Mas o que exatamente é esse composto e como ele pode ser utilizado para realizar a separação de moléculas?

Neste post, vamos explorar os principais aspectos relacionados à agarose e mostrar como ela se tornou um elemento fundamental nas análises bioquímicas modernas. Então prepare-se para mergulhar nesse mundo fascinante da biotecnologia e descobrir tudo sobre a utilização da agarose na técnica de eletroforese.

A agarose é um polissacarídeo não ramificado que é extraído da parede celular de certas espécies de algas marinhas. Ela é mais comumente usada em laboratórios de biologia molecular para realizar eletroforese em gel, um método usado para separar moléculas de DNA, RNA ou proteínas com base em seu tamanho.

Qual a função da Agarose?

A  agarose é utilizada em eletroforese,  sua função é de uma “peneira” de eletroforese usada para a separação de fragmentos de ácido nucleico (DNA ou RNA) com base em seu tamanho.

O DNA/RNA carregado negativamente migra através dos poros de um gel de agarose em direção à extremidade carregada positivamente do gel quando uma corrente elétrica é aplicada, com fragmentos menores migrando mais rapidamente. As bandas resultantes podem então ser visualizadas usando luz ultravioleta (UV).

A agarose  é uma glicoproteína que se encontra nas paredes celulares das algas roxas. É usada como um gel para eletroforese, uma técnica que permite separar as cargas elétricas de moléculas em solução. A agarose é um dos componentes do ADN, o outro sendo a água. A agarose também é usada na fabricação de medicamentos e outros produtos químicos.

Propriedades da Agarose

A agarose é uma substância usada em laboratórios para a realização de eletroforese. Ela é um polissacarídeo obtido a partir da parede celular de algas marinhas vermelhas, e sua principal propriedade é formar uma rede tridimensional quando dissolvida em água quente.

Essa rede tem poros que permitem separar moléculas de diferentes tamanhos durante a eletroforese. A espessura dos poros depende da concentração de agarose utilizada na preparação do gel: quanto maior a concentração, menor o tamanho dos poros.

Aplicações da Agarose

A agarose  é um polissacarídeo que tem uma ampla gama de aplicações na biologia molecular. Uma das principais utilizações da agarose é como matriz para a eletroforese em gel, que separa as moléculas com base no seu tamanho e carga.

Além disso, a agarose também é usada como meio de cultura para bactérias, fungos, células animais e vegetais. Ela ajuda no crescimento desses organismos quando adicionados nutrientes necessários.

A agarose também é utilizada na purificação de proteínas através da cromatografia em coluna. Nesse processo, as proteínas são ligadas à matriz de agarose por interações químicas específicas e depois eluídas com diferentes solventes.

Outra aplicação importante da agarose é sua utilização na produção de microcápsulas contendo compostos bioativos. Essas microcápsulas podem ser usadas em sistemas farmacêuticos para transportar drogas ou outras substâncias terapêuticas diretamente às áreas afetadas do corpo humano.

 

Vantagens da agarose na eletroforese

A agarose é uma molécula de polissacarídeo extraída da alga Gelidium e da garrafa, que são plantas marinhas. A agarose é usada na eletroforese porque é um gel de pós-carga, o que significa que as moléculas de DNA ou RNA se movem através do gel sob a ação de uma corrente elétrica. As partículas mais pesadas se movem através do gel mais lentamente do que as partículas mais leves.
As vantagens da agarose na eletroforese são:

1. É mais barata que outros materiais usados para a eletroforese.
2. É fácil de preparar, mesmo para usuários sem experiência.
3. É versátil; pode ser usado para separar diferentes espécies de DNA ou RNA, dependendo do tamanho da amostra e da densidade do gel.
4. Não requer condições especiais de armazenamento ou manipulação.
5. É não-tóxico e biodegradável, além de ter baixo impacto ambiental.

Tipos de Agarose para eletrorese

Existem diferentes tipos de agarose disponíveis para eletroforese, e a escolha do tipo adequado depende das necessidades específicas da sua experiência. Aqui estão alguns tipos comuns de agarose usados em eletroforese:

1. Agarose de Baixa Eletroforese: Esta é a forma mais comum de agarose usada em eletroforese de DNA. É ideal para separar fragmentos de DNA de tamanhos médios, como os gerados por PCR. A concentração típica varia de 0,5% a 2%.
2. Agarose de Alta Eletroforese: Essa agarose possui uma concentração maior, geralmente acima de 2%. É usada quando se deseja separar fragmentos de DNA maiores, pois ela proporciona melhor resolução em géis mais densos.
3. Agarose Pulsed-Field: É uma agarose especializada usada em eletroforese de campo pulsado, uma técnica avançada para separar fragmentos de DNA muito grandes, como cromossomos inteiros. Possui características especiais de gelificação para lidar com a separação de grandes fragmentos de DNA.
4. Agarose para Eletroforese de RNA: Algumas marcas oferecem agarose otimizada para a separação de RNA. Elas podem ser tratadas para reduzir a degradação do RNA e são adequadas para a eletroforese de ácidos nucleicos de RNA.
5. Agarose de Baixa Fundição: Esta é uma agarose que tem um ponto de fusão mais baixo, o que facilita o corte dos fragmentos de interesse do gel após a eletroforese. É útil quando você deseja recuperar fragmentos de DNA ou RNA de forma eficiente.
6. Agarose de Ultra Resolução: Essa agarose é projetada para proporcionar uma resolução superior na separação de fragmentos de DNA muito próximos em tamanho. É usada quando é necessária alta precisão na análise de tamanho de fragmentos.
7. Agarose de Baixo Peso Molecular: Esta é uma agarose projetada para separar moléculas menores, como oligonucleotídeos. Possui uma estrutura molecular diferente da agarose de peso molecular regular.

A escolha do tipo de agarose depende das características das moléculas que você está separando, do tamanho dos fragmentos, da resolução desejada e das condições específicas do experimento. Certifique-se de seguir as instruções do fabricante para preparar e utilizar a agarose corretamente, garantindo assim resultados precisos e confiáveis em sua eletroforese.

Preparando o Gel de Agarose

Quando se trabalha com eletroforese, preparar o gel de agarose é uma das etapas mais importantes para garantir a qualidade dos resultados. A agarose é um polissacarídeo que forma uma rede tridimensional quando dissolvida em água quente, criando espaços vazios que permitem a separação dos fragmentos de DNA.

Para preparar o gel de agarose, primeiro é necessário pesar a quantidade correta do pó da agarose e adicioná-lo em um recipiente contendo tampão de corrida. Em seguida, aqueça essa mistura no micro-ondas ou banho-maria até que todo o pó esteja completamente dissolvido.

Após isso, adicione corante ao gel ainda líquido para melhor visualização durante a corrida e despeje-o cuidadosamente na bandeja da eletroforese. É importante deixá-lo esfriar antes da aplicação das amostras.

 

Qual o tipo de agarose devo usar para a eletroforese?

Ao escolher o tipo de agarose   para eletroforese, é importante considerar a concentração necessária para separar as moléculas desejadas. Agaroses com baixo peso molecular são indicadas para fragmentos menores de DNA ou RNA, enquanto aquelas com maior peso molecular devem ser usadas para separação de moléculas maiores.

Outro fator a se levar em conta é o tamanho dos poros da matriz formada pela solução de agarose. Quanto menor o tamanho dos poros, mais alta será a resolução da técnica. Dessa forma, agaroses  com menor grau de gelificação oferecem maior eficiência na separação dessas moléculas.

Além disso, também pode ser necessário adaptar o tipo de agarose   utilizado dependendo do tipo de equipamento que será utilizado na análise das amostras. Por exemplo, alguns sistemas requerem uma taxa específica de fluxo dentro do aparato e podem não funcionar adequadamente com determinados tipos ou concentrações de agarose.

Em resumo, ao escolher o tipo certo de agarose para sua eletroforese é preciso levar em conta diversos fatores como a concentração desejada das moléculas analisadas e as especificações técnicas do equipamento utilizado na análise das amostras.

 

 

 

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